Pas d’anticorps, pas de réaction anaphylactique

Un facteur IX oral testé chez la souris

Publié le 30/03/2010

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DE NOTRE CORRESPONDANT

LES COMPLICATIONS liées à la formation d’anticorps inhibiteurs après l’injection intraveineuse (I. V.) de concentrés de facteurs de la coagulation ne sont pas rares. Dans l’hémophilie A, par exemple, elles s’observent chez 20 à 30 % des patients. Les méthodes actuelles visant à y pallier par l’élimination des anticorps inhibiteurs au moyen de l’induction d’une tolérance immunitaire (ITI) sont extrêmement coûteuses. Dans l’hémophilie B (mutation du gène du facteur IX), ces incidents sont un peu moins fréquents (9 à 23 % des patients présentant une forme grave de la maladie) mais les protocoles d’ITI sont aussi moins performants.

Pour parvenir à créer la tolérance immunologique du facteur IX administré par voie orale, des chercheurs de Floride ont utilisé la technique dite plastomique, soit une technique de transfert génique par bombardement particulaire (électroporation) d’ADN plasmidique. Par ce moyen, ils ont obtenu l’expression, au niveau des chloroplastes de cellules végétales (de tabac), du facteur IX (F IX), attaché à la sous-unité bêta de la toxine cholérique (CTB), qui possède un site de liaison au récepteur membranaire de cellules épithéliales intestinales.

Cette méthode a été testée sur des souris réparties en trois groupes : des souris à phénotype sauvage (WT) recevant des feuilles de tabac inchangées, et des souris recevant, dans leur alimentation, la plante transplastomique contenant le facteur IX attaché à la toxine cholérique, avec (CTB-FF IX) ou sans (CTB-F IX) insertion d’un site de clivage par la furine. Au bout d’un mois, les rongeurs recevaient une dose thérapeutique de F IX humain recombinant en I.V. pendant deux mois. Les animaux WT développaient des réactions allergiques sévères avec une survie de 20 à 25 %. À l’inverse, la survie était de 90 % et 93 % chez les souris CTB-F IX et CTB-FF IX, respectivement. Les tests de Bethesda ont, de leur côté, objectivé l’abolition complète ou quasi complète de la formation d’anticorps inhibiteurs (indétectables ou réduits jusqu’à cent fois moins que chez les souris contrôles). Les auteurs ont pu vérifier, lors d’une épreuve de réintroduction de l’antigène F IX, que cet effet s’observait, en outre, à long terme (jusqu’à sept mois, qui représente 40 % de la durée de vie d’une souris).

Diminution des IgE.

Il est intéressant de noter que ces résultats s’accompagne d’une diminution des concentrations en IgE (< 40 ng/mL), ce qui suggère que les réactions anaphylactiques prévenues chez les animaux traités sont IgE-dépendantes chez la souris à hémophilie B. Enfin, des techniques d’immunocoloration ont pu confirmer que la délivrance du F IX humain se faisait au niveau des plaques de Peyer de l’iléon.

Ces travaux suggèrent qu’il est donc possible de surmonter les problèmes de tolérance immunologique de l’administration du facteur IX dans l’hémophilie au moyen de sa délivrance, sous forme encapsulée dans des cellules végétales préparées de manière adéquate, par voie orale. Cette encapsulation protège la protéine thérapeutique contre une dégradation par les acides et les enzymes gastriques. L’attachement du facteur de coagulation à la toxine cholérique s’avère suffisamment stable pour permettre la délivrance du F IX au niveau du GALT (tissu lymphoïde associé au tube digestif). Cette méthode d’administration protège contre le développement de réactions anaphylactiques, en particulier en prévenant la formation d’IgE. Il semble, par ailleurs, que l’insertion d’un site de clivage par la furine (qui guide la libération de la protéine fusionnée, ici le F IX, à partir de l’épithélium intestinal) ne soit pas indispensable, même si elle améliore l’expression du F IX dans les cellules végétales. Les auteurs estiment cependant que, en pratique, l’administration orale du facteur IX devrait être répétée (tous les deux mois, estiment-ils), pour maintenir un état de tolérance prolongé.

D Verma, H Daniell et coll. Oral delivery of bioencapsulated coagulation factor IX prevents inhibitor formation and fatal anaphylaxis in hemophilia B mice. Proc Natl Acad Sci USA (2010) Publié en ligne.

Dr BERNARD GOLFIER